细胞免疫荧光注意事项?细胞免疫荧光步骤对大家来说一定是很陌生的,他是一种抗原抗体反应,好像对我们来说他显得很遥远的样子,因为我们并不了解他能做什么,通过这种技术可以让我们对抗原或抗体的性质、定位一次来分析出更多的数据。关于细胞免疫荧光注意事项以及细胞免疫荧光注意事项,免疫荧光操作流程,细胞免疫荧光和组织免疫荧光,细胞免疫荧光怎么做,细胞怎么做免疫荧光等问题,美篇养生将为你整理以下的日常知识:
细胞免疫荧光注意事项
细胞免疫荧光步骤对大家来说一定是很陌生的,他是一种抗原抗体反应,好像对我们来说他显得很遥远的样子,因为我们并不了解他能做什么,通过这种技术可以让我们对抗原或抗体的性质、定位一次来分析出更多的数据。
那么细胞免疫荧光步骤是什么呢?
步骤:
1.细胞一定要贴在玻片上(最好可以放入24孔板),为后面照像打基础。
细胞密度适中,大约60-75%满片即可,否则容易脱片。
2.取出细胞后用4%多聚甲醛固定15分钟,现用现配。
(以下各步骤切毋使玻片干燥)
3.PBS冲洗
4.0.1%Triton作用20分钟
5.PBS冲洗
6.10%正常血清封闭10分钟
7.加入一抗,4度孵育过夜(找个小瓶盖将小玻片支起来,抗体就不容易溢出),还要记住“砸片”,就是抗体从较高处落到片子上,以分布均匀。
抗体稀释度1:60,较常用!
8.PBS冲洗4次,各5分钟
9加入荧光二抗,室温30分钟。
抗体稀释度1:400,较常用!
10. 同8。
11.90%甘油封片。
也很关键阿,多封几次才有体会。
12.避光保存,或到显微镜下观察。
细胞免疫荧光,这对很多人来说都是第一次听说这个东西,也不知道他对我们会有什么好处与坏处,科学研究就是这样子的,普通老百姓是不会明白其中的道理的,但是这些研究也是确实的在我们的生活中取得了成果,能够让大家过的更加舒适。
sigam dapi染料怎么用
使用方法:(仅供参考)
1, 固定细胞或组织样品,经过固定后,适当洗涤除去固定剂。
如果需要进行免疫荧光染色,可先进行免疫荧光染色,染完毕后再进行 DAPI 染色。
如果不需要进行其它染色,则直接进行 DAPI 染色。
2, 对于贴壁细胞或组织切片,加入少量 DAPI 染色液,覆盖住样品即可。
对于悬浮细胞,至少加入待染色样品体积 3 倍的染色液,混匀。
3, 室温染色 5-10 分钟。
4, 吸除 DAPI 染色液,用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次,每次 3-5 分钟。
5, 置于荧光显微镜下观察,激发波长 360-400nm。
DAPI 溶液注意事项:
DAPI 被普遍认为具有致癌性,操作时应戴手套,并避免交叉污染。
本产品需避光,并尽量避免反复冻融。
荧光染料都存在淬灭问题,建议染色后尽量当天完成检测。
为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂
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